一,在選擇合適的色譜柱時(shí)，需考慮的因素有很多：

（1）選擇一個(gè)固定相，根據(jù)分析對象的選擇性、極性和固定相分子中苯基含量進(jìn)行仔細(xì)判定；

（2）要了解色譜柱直徑如何影響柱效、溶質(zhì)保留值、柱頭壓和載氣流速等因素；

（3）確定多長的柱長會(huì)影響溶質(zhì)的保留值、柱頭壓及成本；

（4）從柱容量、惰性、流失和溫度上限出發(fā)，正確評估薄、厚液膜色譜柱的不同。

二,要選擇色譜柱，首先需要確定要使用的是填充柱還是毛細(xì)管柱。

填充柱比毛細(xì)管柱具有更高的樣品容量，雖然這一差距由于HP發(fā)明了大孔 530mm 毛細(xì)管而大大縮小。檢測器靈敏度的改進(jìn)也減少了對大劑量樣品的需要。填充柱可能具有優(yōu)勢的領(lǐng)域是氣體樣品的分析。現(xiàn)代高效液相色譜中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。

三，毛細(xì)管柱

1.色譜柱材料,這種材料必須盡可能是惰性的，尤其是對于痕量分析或容易拖尾的化合物，例如硫醇或類似的活性化合物。對于毛細(xì)管柱，熔融石英是可選的材料。

有兩種類型的熔融石英毛細(xì)管柱：壁涂開管柱 (WCOT) 色譜柱和多孔層開管柱 (PLOT) 色譜柱。WCOT 色譜柱是固定相液膜涂漬在去活的色譜柱壁上。這是氣相色譜中最常用的色譜柱。PLOT 色譜柱中固定相是固體物質(zhì)涂漬到色譜柱壁上。

填充柱可以是玻璃或金屬，通常是不銹鋼的。金屬雖然比較有活性，但其對非極性物質(zhì)比較穩(wěn)定。但是如果樣品中有極性組分需要分析，請選擇玻璃柱。如果玻璃柱還是活性強(qiáng)（引起峰拖尾、樣品丟失等），請進(jìn)行去活處理。

2.固定相,選擇毛細(xì)管柱時(shí)，首先需要確定是否需要 PLOT 色譜柱。下面是 3 種 PLOT 色譜柱的典型應(yīng)用領(lǐng)域：分子篩 不揮發(fā)氣體，對水比較敏感二乙烯基苯 (DVB) — HP-PLOT Q C1 到 C3 全部異構(gòu)體的分離，部分 C4 和更高的（直到 C14）的異構(gòu)體分離，極性化合物，揮發(fā)性溶劑可以允許含水氧化鋁 Al2O3 C1 到 C10 異構(gòu)體的分離, 對水比較敏感.

四,填充色譜柱

1.正相色譜,正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica），以及其他具有極性官能團(tuán)，如胺基團(tuán)

(NH2,APS)和氰基團(tuán)（CN，CPS）的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他團(tuán)的極性較強(qiáng)，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中的各組份的極性大小，即極性強(qiáng)弱的組份最先被沖洗出色譜柱。

2.反相色譜,反相色譜填料常是以硅膠為基礎(chǔ)，表面鍵合有極性相對較弱的官能團(tuán)的鍵合相。

反相色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水，緩沖液與甲醇，已腈等混合物。

樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)組合最先被沖出，而極性弱的組份會(huì)在色譜柱上有

更強(qiáng)的保留。常用的反相填料有C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B）、C6H5（Phenyl）等。

3.聚合物填料,聚合物調(diào)料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要優(yōu)點(diǎn)是在PH值為1～14均可使用。相對與硅膠基質(zhì)的C18填料，這類填料具有更強(qiáng)的疏水性；大孔的聚合物填料對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。現(xiàn)在的聚合物填料的缺點(diǎn)是相對硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低。

4.其他無機(jī)填料,其它HPLC的無機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質(zhì)，一般僅限于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐漸成為反相色譜填料。這種填料的分離不同與硅膠基質(zhì)烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ)，不再需其它的表面改性，該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng)，石墨化碳可用于分離某些幾何導(dǎo)構(gòu)體，又由于HPLC流動(dòng)相中不會(huì)被溶解，這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可用于HPLC，氧化鋁微粒剛性強(qiáng)，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床，其優(yōu)點(diǎn)是可在PH高達(dá)12的流動(dòng)相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強(qiáng)，應(yīng)用范圍受到一定的限制，所以未能廣泛應(yīng)用，新型氧化鋯填料也可用于HPLC，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應(yīng)用PH范圍1～14，溫度可達(dá)100℃。由于氧化鋯填料幾年才開始研究，加之面臨的實(shí)驗(yàn)難度，其重要用途與優(yōu)勢尚在進(jìn)行中。