二手LC高效液相色譜儀分析中，通過向流動相中加入改性劑調節pH值和調節流動相的溶劑極性強度，可以改善分離的選擇性。
一、向二手LC高效液相色譜儀流動相中加入改性劑調節pH值：
1、抑制溶質離子化：
反相液相色譜中，常向含水流動相中加入酸、堿或緩沖溶液，使流動相的pH值控制在一定數值，抑制溶質離子化，減少譜帶拖尾，改善峰形，以提高分離選擇性。例如在分析有機弱酸時，常向甲醇－水流動相中加入1%甲酸（或乙酸、三氯乙酸、磷酸、硫酸），抑制溶質離子化，以獲得對稱的色譜峰。對于弱堿性樣品向流動相中加入1%三乙胺，也可以達到同樣的效果。
2、調節離子強度：
反相液相色譜中，當被分析物質是易離解的有機物時，隨流動相pH值的增加，鍵合相表面殘存的硅羥基和堿的陰離子的親和能力增強，會引起峰形拖尾并干擾分離，可在流動性中加入0.1%～1%的乙酸鹽、硫酸鹽或硼酸鹽。因為鹽效應會減弱殘存硅羥基的干擾作用，可抑制峰形拖尾并改善分離效果。但經常使用磷酸鹽或鹵化物，會造成硅烷化固定相的降解。
通常調節pH值對中性化合物的影響不大，但對帶有離子化基團的化合物（如氨基、羧基和羥基等）保留因子影響可達10～30倍，分離度變化明顯。但如果使用的流動相中加入了緩沖鹽，最好在使用前用純水過渡。如果緩沖鹽或離子對試劑濃度較低，需要較長時間平衡。  
二、調節二手LC高效液相色譜儀流動相的溶劑極性強度：
1、由強到弱：
一般先用90%的乙腈或甲醇－水或緩沖溶液進行試驗，可很快得到分離結果，然后根據出峰情況調整有機溶劑（乙腈或甲醇）的比例。
2、三倍規則：
每減少10%的有機溶劑（乙腈或甲醇）的量，保留因子增加約3倍，此為三倍規則。調整時注意觀察各個峰的分離情況。
3、粗調轉微調：
當分離達到一定程度時，應將有機溶劑（乙腈或甲醇）10%的改變量調整為5%，并據此規則逐漸降低調整率，直至各組分的分離情況不再改變。