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如何優化二手LCMSMS儀器參數?

發布時間:2019-04-15       點擊次數:10994

二手LC/MS/MS 系統具有非常高的靈敏度、選擇性、重現性,在蛋白與肽藥物代謝機理及動力學研究等方面,都可快速提供穩定、可靠的結果。

如何優化二手LCMSMS儀器參數?

1,CAL先校準,用PPG或-己知化合物檢驗,如偏差不大,可以不用做質量校準,但偏高偏低要心中有數;
2,先用濃度大約0.1-1 ppm的標樣,通過Syringe Pump以5-10ul/min優化Compound項下面的參數,如DP、CE、EP、CXP及CAD等;
3,順序: Q1 Scan Product lon Scan +MRM ;
4,不同化合物參數有可能差別很大,接通LC用FIA優化其他參數及源位置,或接一個三通,樣品仍由注射泵進入離子源,同時LC保持需要的流量,優化溫度和Gas1及Gas2,CXP、CAD、EP優化后通常不用再改,在保證樣品充分離子化的基礎上,DP低些可使母離子豐度提高,總靈敏度相應提高;
5,質量范圍不要太寬,涵蓋待測離子再增加20-30amu即可采樣時間適當長些可使噪聲降低:當同時檢測數上對離子時,MRM采樣時間可以降全數十毫秒,而檢測離子對不多時,每對離子可使用200毫秒左右;
6,母、子離子輸入的質量數值要選準,要根據Q1 Scan及ProductIonScan得到的結果輸入,準確到0.1amu。當不能確定準確質量數時,可選待測質量數上下各0.1amu,同時數對離子進行優化,最終找出靈敏度最佳的一對離子。例如320.9-152.0、321.0-152.0、321.1-151.9...,若樣品較雜,同一化合物需要選擇幾對母、子離子,經進樣實驗找出哪對有干擾,去掉,保留7不易受十擾的1~ 2對離子;
7,每對離子各參數分別設,如DP, CE,Time等,對較弱離子對,采樣時間可適當長些;
8,手動運行Ramp進行參數優化, 各參數分別優化,Step選小此,范圍不用太寬,每個參數重復優化兩次,以減小偶然誤差。手動優化效果比自動優化(Auto)效果好,根據LC流量和流動相組成確定溫度Tem、Gas1及Gas2。當流量大,水相多時,溫度及氣流要大,但注意Gas2與Tem的關系。離子源噴霧位置是根據LC流量調節的,基本上流量固定,位置就固定;
9噴霧電壓太高有可能導致放電;
10,許多參數五相影響,需要耐心地反復細調,使信噪比得以改善。

 

                                

 

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