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SCIEX Triple TOF系統上的SWATH采集技術(二)

發布時間:2023-12-21       點擊次數:1117

檢測低豐度分析物,在復雜樣品中

樣品越復雜,質譜系統越難對低豐度分析物進行鑒定和定量分析。SWATH采集技術由TripleTOF技術提供支持,可找到所有可檢測的物質,無論它們的濃度高低。

檢測復雜樣品中的低豐度化合物充滿挑戰,即使對于如今功能強大的MS分析儀來說也是如此。MS譜中的干擾會導致檢測低含量分析物面臨困難,即使使用高分辨率系統也無法解決問題。同時,高含量分析物會占用質譜儀的大量周期時間(MS/MS一般按強度順序采集),沒有時間捕捉與低含量分析物有關的MS/MS信息。要解決這個問題,需要在以下技術性能之間建立重要的相互關系:Q1采集窗口控制和在高速下保證MS/MS采集分辨率。

關鍵技術標準1:可變窗口采集

SCIEX SWATH 采集技術由可變窗口采集提供支持。通過使用可以調整 Q1 隔離窗大小的控件,您可以在樣品密度高的 m/z 區域(預期有大數量的化合物和分析物的區域)利用更小的Q1 m/z 窗口。這樣一來,專一性會更高,從而能夠捕捉與樣品相關的更深入信息,降低漏掉復雜樣品中低豐度峰的風險。

以蛋白質組學樣品為例
大量肽的質量范圍介于500-800 m/z 之間。使用可變窗口采集,您可以在此質量范圍內利用更小的 Q1 SWATH 窗口(在此密集樣品區域中覆蓋更多的峰),然后在其他質量范圍內使用更寬的窗口。總之,此策略可為您提供全面的分析物覆蓋,并且可以進一步檢測樣品中的低豐度化合物。

關鍵技術標準2:在高速下保證MS/MS分辨率

如前所述,復雜樣品會占用質譜儀寶貴的掃描時間,導致系統只能有足夠的時間捕捉樣品中含量更多的分析物的 MS/MS 信息,而這些分析物可能并不是您要分析的物質。在利用數據依賴型采集策略時,低豐度化合物中檢測的峰甚至可能不會觸發 MS/MS 采集,而這種采集對化合物鑒定至關重要。

借助 TripleTOF6600 SWATH采集技術每秒多可采集 100 MS/MS 譜圖,同時不會降低光譜分辨率,從而提供更高數量的 Q1 窗口。這樣不僅可以更好地檢測低含量分析物,重要的是,還可以利用每份樣品完成更多的化合物鑒定和定量分析。

 

首次分析時可捕捉樣品完整的數字檔案

停止儲存樣品,開始儲存數據。只需分析一次,SWATH采集技術就可以收集所需要的與樣品相關的所有數據。如果分析事件至關重要、無法重復分析、樣品數據有限或樣品可能會講解,這種技術的優勢就更為明顯。

作為非數據依賴型采集策略,SWATH采集技術可以在所有可檢測峰上采集MSMS/MS信息—如果以后出現新問題,只需重新查詢樣品數據即可

 

對分析物進行定量分析

高質量、高專一性定量分析的核心在于出色的MS/MS靈敏度、寬動態范圍和非凡重現性。SWATH采集技術采用SCIEX TripleTOF技術,可提供上述三種優勢。

通常,不僅僅是樣品的成分十分重要,樣品中成分的"含量"對我們得出的結論或制定決策也很關鍵。SWATH采集技術是一種非數據依賴型策略,擁有其他技術所不具備的功能。從使用高分辨率MS/MS數據(通過MS)提供深度高一個數量級的定量覆蓋,到經過驗證的樣品間重現性,SWATH采集可以提供可靠的定量結果,從而推進研究,達到標準的MRM定量分析策略水平。

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