在操作二手液相色譜時(shí)，色譜柱是在室溫環(huán)境下工作的。如果實(shí)驗(yàn)室的溫度能保持不變的話，不會(huì)有什么大問(wèn)題。但大多數(shù)的工作環(huán)境溫度是不斷變化的，因此若想將在某實(shí)驗(yàn)室開(kāi)發(fā)的一種液相色譜方法應(yīng)用到其他實(shí)驗(yàn)室的話，溫度的差別就會(huì)引起較復(fù)雜的問(wèn)題。溫度的影響在所有的色譜分析方式中都是存在的。 
    等度保留  
   等度洗脫時(shí)溫度會(huì)影響保留時(shí)間。我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)溫度升高時(shí)所有的色譜峰都前移了，等度洗脫時(shí)一般溫度每升高一攝氏度保留時(shí)間會(huì)縮短1-3%，保留時(shí)間變化率約為2%/℃。  
   擁有溫控系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室一般都有全天候溫控設(shè)置，但這種設(shè)置可能引起室溫顯著變化，這對(duì)整夜運(yùn)行的色譜系統(tǒng)就會(huì)有一些影響，例如我們實(shí)驗(yàn)室的夜間溫度就設(shè)為4-7℃。在不同的季節(jié)，實(shí)驗(yàn)室的夜間溫度可能比正常工作日的溫度高或低，這種溫度的變化就會(huì)使色譜峰離開(kāi)“保留時(shí)間窗”，造成連續(xù)進(jìn)樣中產(chǎn)生一系列的無(wú)效數(shù)據(jù)。
    還有一個(gè)可能的溫度影響因素就是色譜儀器在實(shí)驗(yàn)室的位置。當(dāng)色譜柱正對(duì)著空調(diào)的送風(fēng)口時(shí)，雖然整個(gè)實(shí)驗(yàn)室的溫度非常穩(wěn)定，但色譜系統(tǒng)的溫度就會(huì)不斷的變化。這就是我們要使用柱溫箱的原因之一。             
    梯度保留   
  溫度變化對(duì)梯度洗脫和等度洗脫的影響趨勢(shì)是一樣的。20℃的溫度變化引起保留因子的變化大約為兩倍，40℃的變化使保留改變了約20%。平均來(lái)說(shuō)，色譜保留變化約為0.2%/℃。由此可見(jiàn)，溫度變化對(duì)梯度洗脫的影響要小于對(duì)等度洗脫的影響。即便如此，若梯度洗脫時(shí)不控制溫度的話，保留值一般都會(huì)有較大的變化。
    選擇性的變化  
   發(fā)現(xiàn)溫度變化能引起選擇性顯著變化。選擇性的變化是和成分相關(guān)的。
   峰位置的相對(duì)變化和溫度的變化是有規(guī)律可循的。當(dāng)條件確定以后，這個(gè)規(guī)律就是可預(yù)測(cè)的。溫度引起的選擇性變化的多年來(lái)一直未受重視。最近，施耐德等人發(fā)現(xiàn)能夠?qū)囟茸鳛橐粋€(gè)調(diào)整選擇性的有力工具。

 
    溫度控制 
    從實(shí)踐出發(fā)，為了獲得一致的結(jié)果我們必須要控制柱溫，使用柱溫箱是最好的辦法。目前商業(yè)化的柱溫箱有兩種形式：直接加熱色譜柱和通過(guò)空氣傳熱，每種設(shè)計(jì)都有其優(yōu)缺點(diǎn)，而且不同廠商設(shè)計(jì)的LC系統(tǒng)也有不同的限制。在直接加熱型柱溫箱中色譜柱是被夾在金屬加熱器中或被加熱器包裹起來(lái)；而在空氣傳熱型的柱溫箱和氣相色譜柱溫箱很相像，色譜柱是被懸掛在靜止或流動(dòng)的空氣中，通過(guò)加熱空氣來(lái)保持柱溫。如設(shè)計(jì)是把色譜柱浸在液體中（比如水浴中），這在實(shí)驗(yàn)室中很容易搭建，但通常這種設(shè)計(jì)也并不比其他設(shè)計(jì)省力。          
    如果沒(méi)有柱溫箱，最有效的辦法就是將色譜柱隔絕在一個(gè)溫度波動(dòng)最小的地方。例如，可把色譜柱置于泡沫塑料套中或色譜包裝盒中，當(dāng)實(shí)驗(yàn)室溫度基本不變時(shí)效果很好，但這種方法必須要允許保留有一些波動(dòng)。隔絕色譜柱也可以避免結(jié)果受環(huán)境溫度影響。
    溫度平衡 
    我們知道，為了保證分離的重現(xiàn)性，色譜柱在梯度洗脫狀態(tài)下的必須有平衡過(guò)程。當(dāng)一次梯度洗脫分離完成后，一定要用10-15倍柱體積的流動(dòng)相來(lái)沖洗柱子以恢復(fù)柱子的平衡。例如，如果使用B溶劑5-100%的梯度，柱子為150mm´4.6mm（柱體積為1.5ml），當(dāng)流動(dòng)相從100%的B溶劑換回到5%的B溶劑時(shí)，大概需要保持1.5ml/min的流速10分鐘來(lái)恢復(fù)系統(tǒng)平衡，在進(jìn)行下一次梯度變換之前如果系統(tǒng)沒(méi)有平衡,那么保留時(shí)間的重現(xiàn)性就會(huì)很差。
    正如柱子不能完全平衡將導(dǎo)致保留時(shí)間的重現(xiàn)性差一樣，柱溫不平衡也會(huì)導(dǎo)致不理想的后果，這個(gè)問(wèn)題在峰寬上的影響尤其明顯。當(dāng)溫度變化時(shí)除了選擇性和保留時(shí)間的變化之外，峰寬也會(huì)發(fā)生變化。升高溫度通常會(huì)使理論塔板數(shù)（N）升高，峰寬變窄，由于峰面積不變，峰越窄就會(huì)越高，因此升高溫度可以達(dá)到更小的檢測(cè)限。
    不用平衡的流動(dòng)相充分的沖洗柱子會(huì)導(dǎo)致化學(xué)不平衡狀態(tài)，但是當(dāng)柱子在程序升溫的環(huán)境中我們?cè)鯓哟_定不平衡問(wèn)題呢？答案取決于柱子中的流動(dòng)相，如果柱子是在室溫條件下，溶劑瓶、泵和自動(dòng)進(jìn)樣器也在室溫下，那么整個(gè)系統(tǒng)中的溫度就應(yīng)該是穩(wěn)定的。但是，如果柱子是熱的，系統(tǒng)的其他部分和溶劑是室溫，柱頭將比柱尾涼。柱子里的溫度變化將會(huì)影響峰形。
   把溶劑瓶、泵、自動(dòng)進(jìn)樣器加熱至與柱溫相同是不現(xiàn)實(shí)的，所以溶劑預(yù)熱器是最好的選擇。我們用1米長(zhǎng)，0.25mm內(nèi)徑的不銹鋼管作為預(yù)熱器，把這個(gè)不銹鋼管盤(pán)成直徑大約10cm的平面緊貼在柱溫箱里的預(yù)熱器上，再讓流路垂直以便預(yù)熱器能夠位于自動(dòng)進(jìn)樣器和柱子之間，這樣，涼的溶劑從自動(dòng)進(jìn)樣器里出來(lái)到柱子之前經(jīng)過(guò)這個(gè)預(yù)熱盤(pán)升高了溫度。
    當(dāng)流動(dòng)相和柱子之間的溫差增大時(shí)，由溫度不平衡而導(dǎo)致的峰變形就會(huì)加劇。為什么會(huì)看到這些峰變形了呢？這很容易從峰展寬的角度來(lái)解釋。前段的溫度比尾部的溫度高，所以前段走的快。當(dāng)前面比后面走的快的時(shí)候就會(huì)產(chǎn)生展寬的峰。這種現(xiàn)象和梯度洗脫中有種情況是相對(duì)的，就是在一開(kāi)始使用弱極性溶劑小流速后用強(qiáng)極性大流速。雖然使用預(yù)熱器來(lái)改善峰形是一個(gè)很著名的結(jié)論,但峰變形的原因仍然很復(fù)雜。在理想梯度洗脫中，每個(gè)峰都應(yīng)該在相同的環(huán)境中出來(lái)而且以相同的速度通過(guò)柱子，最后得到相同的峰寬。但是很奇怪后出的峰變形問(wèn)題比先出的峰要嚴(yán)重.         
  結(jié)論   
   我們發(fā)現(xiàn)柱溫在二手液相色譜梯度洗脫過(guò)程中扮演了一個(gè)重要的角色，首先，提高柱溫可以縮短保留時(shí)間，其次，我們看到柱溫還可以影響選擇性，最后，溫度的不平衡會(huì)導(dǎo)致峰扭曲變形。這些提醒我們，如果想得到穩(wěn)定可靠的分離結(jié)果，色譜柱的溫度變化是不可忽視的。