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大氣壓離子化技術(API)是一類軟離子化方式,它的出現,成功地解決了二手LC-MS液相色譜和質譜聯用的接口問題,使二手LC-MS液相色譜-質譜聯用逐漸發展成為成熟的技術。API主要包括電噴霧離子化(ESI)、離子噴霧離子化(ISI)和大氣壓化學離子化(APCI)3種模式。它們的共同點是樣品的離子化在處于大氣壓下的離子化室完成,離子化效率高,大大增強了分析的靈敏度和穩定性。ESI,ISI和APCI,3種電離方式同時可作為二手LC-MS的接口。
這里介紹
二手LC-MS液相色譜-質譜聯用
:大氣壓化學離子化APCI技術。
用于二手LC-MS液相色譜-質譜聯用的APCI技術與傳統的化學電離接口不同,它并不采用諸如甲烷一類的反應氣體,而是借助電暈放電啟動一系列氣相反應以完成離子化過程,就其原理,它也可被稱為放電電離或等離子電離。從二手液相色譜流出的樣品溶液進入一具有霧化氣套管的毛細管,被氮氣流霧化,通過加熱管時被氣化。在加熱管端進行電暈尖端放電,溶劑分子被電離,充當反應氣,與樣品氣態分子碰撞,經過復雜的反應過程,樣品分子生成準分子離子。
正離子模式的化學電離過程。R代表溶劑,M代表樣品分子,MH+為生成的準分子離子。如果溶劑比樣品堿性弱,則生成MRH+,都屬于準分子離子。準分子離子也能以負離子模式生成準分子離子,主要應用于具有強的電子親和力的化合物。樣品分子的準分子離子經篩選狹縫,進入質譜計。整個電離過程是大氣壓條件下完成。
APCI是一種大氣壓霧化技術,采用電暈放電方式使流動相離子化,能大大增加離子與樣品分子的碰撞頻率,因此,大氣壓化學電離靈敏度要比化學電離高3個數量級。由于離子源處于大氣壓下,所以它對LC系統的流速不強加任何限制。APCI是一種源的設計而不是接口的設計,有三種接口可用于APCIMS,其中加熱霧化是最普通的一種。APCI為軟電離技術,由于這種軟電離方式缺乏碎片離子產生,為得到進一步的結構信息,需進行碰撞誘導斷裂,這在接口中可完成。通過對其中電壓的調節,可以得到不同斷裂程度的質譜。通過串聯質譜(MS-MS)技術獲得使液相色譜-大氣壓化學電離串聯質譜(
LC-APCI-MS-MS
)成為精確、細致分析混合物結構信息的有效技術。因為一級質譜的準分子離子是二級質譜進一步分裂的最佳母離子。
在大量生物樣品的常規測試中,為了避免其中含有的不揮發性物質,如無機鹽、蛋白質等對離子源的污染,產生了Z-spray和正交氣相輔助ESI等離子源,這些離子源的共同特點是噴霧針與進樣錐孔、環狀電極不在一條軸線上,而是成一定的角度,有垂直式、轉彎式、斜角式以及組合式。這些離子源的應用,大大減少了離子源的污染。
大氣壓電離技術的出現使二手LC-MS液相色譜-質譜聯用 成為一種靈敏度高(pg級)、選擇性強、樣品用量少、分析速度快的儀器聯用分析方法。 電噴霧源多電荷的形成使其成為蛋白質生物分子研究領域不可缺少的手段,該法的高靈敏度使生物學家能夠在分子水平上研究蛋白質轉移修飾,如糖基化、磷酸化、二硫鍵、脫酰氨基作用、蛋氨酸或色氨酸的氧化作用等,真正揭示結構與生物功能的關系。化學源對于極性較小的化合物(如烴類、醚類、醛類)也能獲得理想的結果,在有機化合物分析中扮演重要角色,特別是在藥物分析,從原材料篩選、生產過程中質量控制到成品純度鑒定,從藥物毒理、臨床等領域都展現了一定的使用潛力。
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